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螺口厌氧试管用于Hungate滚管技术培养厌氧微生物

             来源:丰美仪器公司 阅读:13970 更新时间:2020-02-19 13:28

厌氧试管是亨盖特厌氧滚管技术的重要组成部分,专用于厌氧微生物的培养。
亨盖特Hungate厌氧滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数,还可以用于有害腐败菌(如酪酸菌)或病原菌(如肉毒梭状芽孢杆菌)的分离与鉴定。
亨盖特Hungate厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特(Hungate)于1950 年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进,从而使亨盖特厌氧技术日趋完善,并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
1.铜柱系统除氧
铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。此管的大小为40—400mm,两段被加工成漏斗装,外壁绕有加热带,并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。铜柱两端连接胶管,一端连接气钢瓶,一端连接出气管口。由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2,故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时,铜和气体中的微量O2化合生成CuO,铜柱则由明亮的黄色变为黑色。当向氧化状的铜柱通入H2时,H2与CuO中的氧就结合形成H2O,而CuO又被还原成了铜,铜柱则又呈现明亮的黄色。此铜柱可以反复使用,并不断起到除氧的目的。当然H2源也可以由氢气发生器产生。
5.2 预还原培养基及稀释液的制备
制作预还原培养基及稀释液时,先将配制好的培养基和稀释液煮沸驱氧,而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中,一般琼脂培养基装4.5-5ml,稀释液装9ml,并插入通N2气的长针头以排除O2。此时可以清楚地看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红最后变成无色,说明试管内已成为无氧状态,然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖,灭菌备用。
5.3 双歧杆菌样品不同稀释度的制备
在无菌条件下准确称取1g固体或用无菌注射器吸取1ml混合均匀的液体样品,而后加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中,用震荡器将其震荡均匀,制成10-1稀释液。用无菌注射器吸取1ml 10-1稀释液至另一支装有9ml生理盐水的试管中,制成10-2稀释液。按此操作方法依次进行10倍系列稀释至10-7,制成不同浓度的样品稀释液。通常选10-5、10-6、10-7三个稀释度进行滚管培养计数。
5.4厌氧滚管培养法
将盛有融化的无菌无氧琼脂培养基试管放置于50℃左右的恒温水浴中,用1ml无菌注射器分别吸取10-5、10-6、10-7三个稀释度的稀释液各0.1ml于融化了的琼脂培养基螺口厌氧试管中,而后将其平放于盛有冰块的盘中或特制的滚管机上迅速滚动,这样带菌的融化培养基在螺口厌氧试管内壁立即凝固成一薄层。每个稀释度重复3次,而后置于37℃(酸奶样品42℃)恒温培养箱中培养。一般培养24—48小时后,即可在螺口厌氧试管的琼脂层内或表面长出肉眼可见的菌落。

厌氧试管是亨盖特厌氧滚管技术的重要组成部分,专用于厌氧微生物的培养。


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